大鼠药物成瘾模型构建 发布时间:2019-11-01 10:43:16  点击:645次

一、吗啡依赖形成条件性位置偏爱大鼠动物模型的建立

本部分实验把大鼠吗啡身体依赖的制备与条件性位置偏爱训练有机地结合起来,

成功建立了吗啡依赖形成条件性位置偏爱大鼠动物模型,并对条件性位置偏爱行为的

形成、保持和消退进行了全面的观察。

每天老鼠需要解决一个难题,每天总共进行10次试验。但是,有可能老鼠没有学会解决这些难题,而是随机地对寻求毒品的行为做出反应。为了评估这种可能性,我们测量了大鼠在几天内的会话中拼图表现。无论难题困难的,大鼠提高的开始和每一天单向重复测量在每个环节的后期做出正确回答的比例更高。

尽管有这种改善,但在每次实验结束时,大鼠仍然只在大约45%的时间内做出了正确的反应,这表明谜题的困难性。老鼠每天仍在努力解决难题,而且他们往往不得不在一次练习中重新解决问题。


结果发现:(1)连续5天,每天2次,每次从l0mg/kg至50mg/kg以逐日递增剂量的方式皮下注射吗啡,停药后鼠体重明显下降,同时出现了腹泻、激惹等戒断症状,表明大鼠形成了吗啡身体依赖。



训练练后,吗啡注射大鼠在白箱的平均停留时间比对照组明显增加,表明经过5天的训练大鼠能够形成稳定的条件性位置偏爱。

吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱行为的形成、保持和消退有一定的规律。

本实验中大鼠的条件性位置偏爱行为在训练结束后48h形成

12d时达到高峰,24d出现消退,27d条件性位置偏爱行为消失。



二、大鼠海马与吗啡依赖记忆相关差异表达基因cDNA文库的构建和筛选


本部分实验将SSH技术和SMARTTMPCR cDNA合成法结合起来,成功建立了吗

啡依赖形成条件性位置偏爱大鼠海马差异表达基因的cDNA文库,通过反向Northern

杂交初步筛选分离克隆到12个上调表达9个下调表达cDNA片段,并进行了测序和

同源性分析。其中有3个上调表达和1个下调表达cDNA片段与GeneBank己知序列

同源性不足10%,可能是新基因。另外有3个上调表达和2个下调表达cDNA片段与

己知序列同源性在20%-60%之间,可能是己知基因,但多数尚无相关的功能报道。其

余的6个上调表达和6个下调表达cDNA片段的同源性70%以上,应是己知基因;

NELL2, Fau, Ferritin-HKidins 220四种上调表达基因和甘油一3磷酸脱氢酶下调

表达基因己知功能与神经元突触的可塑性改变相关,C2H2锌指蛋白下调表达基因产

物是一种转录抑制因子,与DNA结合后调控相关的基因表达,这些基因可能在大鼠

与吗啡依赖记忆的形成中发挥重要作用。


三、大鼠与吗啡依赖记忆相关差异表达基因mRNA在海马及毗邻脑区的表达

本部分实验利用构建好的吗啡依赖形成条件性位置偏爱大鼠海马差异表达基因

cDNA文库,通过巢式PCR的方法合成地高辛标记的cDNA探针,运用原位杂交技术

研究NELL2, Fau, Ferritin-HC2H2锌指蛋白基因mRNA在大鼠海马及毗邻脑区的

表达,并观察上述四种基因在正常和吗啡依赖形成条件性位置偏爱大鼠海马的表达是

否存在差异,进一步验证差异表达基因的真实性。结果发现:(1)NELL2, Fau, Ferritin-H

C2H2锌指蛋白四种基因mRNA阳性反应细胞除大鼠海马外,还分布于杏仁核群、

扣带后皮质、梨状皮质、纹状皮质以及部分丘脑核团。(2)NELL2, Fau, Ferritin-H

种上调表达基因在吗啡依赖形成条件性位置偏爱实验组大鼠海马的表达明显高于生理

盐水对照组,脑区分布也更广泛;C2H2锌指蛋白下调表达基因则相反,表明本实

验筛选出的差异表达基因真实可信,另外也说明本实验构建的抑制消减杂交文库是成

功的。(3)NELL2, Fau, Ferritin-H, C2H2锌指蛋白基因mRNA阳性反应细胞主要位

于海马Ammon’角的锥体细胞层和齿状回的颗粒细胞层,这两个部位是海马神经元高

度可塑性的区域。提示这四种基因在海马的主要功能可能是参与药物成瘾相关的学习

记忆过程,与大鼠吗啡依赖环境刺激和药物奖赏效应之间条件反射的形成密切相关。

(4)己知表达差异基因的海马,杏仁核群、扣带皮质、梨状皮质等结构都是大脑边缘系

统的重要组成部分,与药物成瘾、行为学习记忆和中枢神经系统的可塑性改变关系密

切。本实验结果提示:大脑边缘系统可能介导了吗啡依赖大鼠与环境相关记忆的形成

过程,其中海马和杏仁核群起核心作用。


参考文献:

1、大鼠海马与吗啡依赖记忆相关差异表_省略_因cDNA的克隆_鉴定及应用研究 庞勇

2、Are Cocaine-Seeking “Habits” Necessary for the Development of Addiction-Like Behavior in Rats? Bryan F.Singer


(编辑:editor)
  • 上一篇:已经没有了
  • 下一篇:已经没有了